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浅谈凝胶过滤层析产品挑选攻略

作者:开云kaiyun登录网页 发布时间:2024-09-09 21:08:18
  

  ,基本原理是依据样品分子巨细和形状进行别离的一种常用的纯化办法,归于非吸附性层析。

  剖析型凝胶过滤层析:关于分辨率有很高的要求,上样体积一般在柱体积的0.3% - 0.5%;运用柱子的高度一般为30cm。而在快速纯度检测和挑选的试验中,常用的是15cm柱高的柱子,能够在供给满足分辨率的前提下,缩短运转时刻,节约样品和缓冲液。

  制备级凝胶过滤层析:关于分辨率有较高的要求,上样体积一般在柱体积的0.5% - 4%。一起,运转时流速较低,运用的柱子高度也比较高 (一般≥ 60cm)。通过纯化后的样品将被直接置换到适宜的缓冲液条件中,用于后续的试验或贮存。

  脱盐与缓冲液置换:与上述精密别离不同,脱盐或缓冲液置换归于组分别离,即,将大分子样品与小分子或离子进行别离的进程,因而关于分辨率的要求相对不高。上样体积可达柱体积的30%。

  依照交联度的不同,用Sephadex G加数字来差异,数字越小交联度越大,构成的孔径越小,对应的别离规划越小。Sephadex G系列填料现在一般大多数都用在脱盐与缓冲液置换,且有多种别离规划、颗粒巨细能够再一次进行挑选。粗颗粒 (Coarse)流速较快,细颗粒 (Fine)流速较慢,分辨率较高。

  Sepharose填料是高流速大分子别离。作为琼脂糖基质的填料,具有非特异性吸附低、回收率高级特色,别离规划宽广,从10kD – 2×104kD,合适分子量巨细差异大而对分辨率要求不高的样本。Sepharose和2,3二溴丙醇反响而成的Sepharose CL系列填料,增强了Sepharose的物理和化学安稳性。

  特别合适含有机溶剂的别离,能接受较强的在位清洗,并能够高温消毒,一起在流速方面也比传统的Sepharose填料有了显着的进步。Sepharose Fast Flow填料为粒径90μm的高度交联的琼脂糖填料,大大加强了机械功能,流速特快,合适工业规划出产。该填料经去电荷处理,非特异性吸附特低,回收率也得到了了进步。极高的化学安稳性,可用多种促溶剂、有机溶剂作业及1-2M NaOH进行在位清洗。

  Superose填料的颗粒细微,巨细散布会集,答应高流速纯化,所以合适中、高压层析系统运用。

  Superdex能够在高粘性洗脱液 (如8M尿素)在比较来说较高的流速下运转。在常用的水性缓冲液和添加剂 (如去污剂、变性剂)中化学安稳,并能够耐受1M的NaOH清洗。

  适应于不同的上样量以及使用意图,Cytiva SEC Increase预装柱供给了丰厚的挑选与杰出的功能,为每一次蛋白纯化,样品别离都确保了非凡的体现。

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